Чаще всего в ветеринарии прибегают к лабораторной диагностике, так как она в первую очередь помогает обнаружить какие-либо нарушения в работе организма животного. Это разнообразные анализы крови (общий, клинический, на СОЭ, лейкоциты), мочи и кала, анализы на гормоны, диагностика методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

Лабораторную диагностику часто проводят несколько раз: для установления вида заболевания, во время его лечения – для контроля за процессом выздоровления, а также по окончании лечения проводится так называемый «контрольный анализ», который обнаруживает полное излечение.

Точность и ценность получаемых результатов исследования зависят от многих факторов: выбора метода, подготовки посуды, реактивов, особенно калибровочных материалов, условий взятия, транспортировки, подготовки и хранения образцов биологического или другого материала, использования антикоагулянтов, консервантов, замораживания, оттаивания при его подготовке, работы приборов, качества и добросовестности выполнения анализа.

Взятие анализов и их транспортировка являются одним из ответственных этапов в работе лабораторий, обеспечивающим успех исследований. Если допущена ошибка на самом первом этапе взятия и транспортировки проб, вся работа лаборатории может оказаться не только бесплодной, но и послужить причиной назначения неадекватного лечения пациенту, от которого получен биоматериал.

Общими требованиями к процедуре отбора и транспортировки проб являются:

1. Знание оптимальных сроков для взятия материала на исследование;
2. Отбор материала из места максимальной локализации возбудителя или пути выделения в окружающую среду;
3. Отбор материала для исследования в необходимом и достаточном объеме с обеспечением условий, исключающих контаминацию проб;
4. По возможности, взятие материала производится до применения антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов или после отмены антибиотиков через 2 - 3 дня (кроме исследования на дисбактериоз);
5. Материал для бактериологических исследований забирают только в стерильную, маркированную посуду;
6. В направлении на исследование должно быть указано:
• фамилия, имя, отчество клиента;
• вид животного, возраст, пол;
• наименование исследуемого материала;
• цель исследования;
• дата и время взятия материала;
• диагноз (предварительный диагноз);
• сопутствующие заболевания;
• применяемые антибактериальные препараты (если есть) и дата окончания антибиотикотерапии
• фамилия, должность и контактный телефон лица, направляющего материал.
7. Материал доставляется в контейнерах, не допуская опрокидывания и расгерметизации. При транспортировке нельзя не допускать смачивания ватных тампонов и замораживания материала.
8. Материал доставляется в лабораторию немедленно или в течение 1-2 часов. При невозможности доставки в указанные сроки биоматериал хранят в холодильной камере, кроме исследования крови на стерильность. При увеличении времени доставки проб до 48 часов необходимо использовать специальные транспортные среды.

Материал для микробиологических исследований

Материал от больных животных отбирают с целью изучения этиологической роли микроорганизмов в возникновении инфекционного процесса. В зависимости от локализации и клинических форм поражений исследованию подвергаются: пробы крови, мочи, молока, фекалий, рвотных масс, гной и пунктаты из закрытых полостей, гной и отделяемое с раневых поверхностей (дренажи и т. п.) ран, выделения из наружных половых органов (влагалища, препуция), из глаз, из ушей, из носовой и ротовой полостей, промывные воды желудка и т. д.

Материал необходимо брать непосредственно из патологического очага. При вероятности возникновения сепсиса необходимым является одновременный забор крови.

Правила отбора проб клинического материала для бактериологических исследований

Разнообразие материала и своеобразие микрофлоры отдельных тканей требует применения определенных методических приемов отбора проб.

1. Материал от больных животных необходимо брать до лечения антибактериальными препаратами или не ранее 10 дней после окончания курса лечения.
2. Следует брать материал непосредственно из очага инфекции или исследовать клинический материал, отражающий вос-палительный процесс в тех или иных органах и тканях (например, мочу при уроинфекциях, кал при дисбактериозах кишечника и т.д.).
3. Важно соблюдать правила асептики для исключения контаминации пробы посторонней микрофлорой.
4. При взятии проб можно использовать стерильные ватные тампоны, транспортные среды, шприцы (для крови, гнойного отделяемого и т.д.).
5. Материал для бактериологического исследования должен быть доставлен в лабораторию не позже 1-2 часов после отбора проб, так как более длительное пребывание при комнатной температуре приводит к гибели ряда микроорганизмов, в том числе возбудителей инфекционного процесса и размножению в этих материалах посторонней гнилостной микрофлоры.

В случае хранения материала в холодильнике срок хранения можно увеличить до 3-4 часов (это не относится к пробам крови и ликвора). Пренебрежение срока¬ми доставки материала приводит к искажению результатов исследования. Использование транспортных сред удлиняет сроки хранения материала до 24-48 ч.

Методика взятия материала для лабораторных исследований

Материал с раневых поверхностей

Взятие материала производят ветеринарные специалисты с соблюдением определенных правил:

• отбор материала можно производить во время операций или при перевязках, с соблюдением правил асептики;
• предварительно поверхность кожи вокруг раны обрабатывают ватным тампоном, смоченным 75% спиртом;
• стерильной салфеткой удаляют некротические массы, гной;
• материал необходимо брать, используя два сухих или увлажненных 0,5 мл. физиологического раствора ватных тампона, со дна и стенок раны по возможности из более глубоких слоев;
• помещают тампоны в стерильные пробирки, предварительно удалив остатки физиологического раствора, или в транспортные среды Стюарта или Эймса.

При наличии дренажей материал отсасывают из дренажей шприцем и собирают в стерильную пробирку. Можно направлять в лабораторию концы удаленных дренажных трубок.

При исследовании свищей и фистул первоначально выделяющиеся секреты удаляют ватным тампоном и помещают в стерильную пробирку - «влажную камеру».

При язвах или узелковых поражениях. Пораженную область кожи дезинфицируют, удаляют поверхностные корки и отбирают материал со дна язвы или узелкового утолщения.

Если имеется экссудат, его собирают шприцем или стерильным тампоном.

При ожоговом поражении кожи поверхность раны необходимо предварительно дезинфицировать и брать образец пунктата для количественного исследования.

При укушенных ранах отсасывают гной из раны шприцем или получать его во время надреза, дренирования или обработки инфицированной раны. Не рекомендуется проводить посев материал из ран при свежих укусах, так как в этот период трудно установить природу инфекционного агента.

При глубоких поражениях или абсцессах предварительно поверхность обрабатывают ватным тампоном, смоченным 75% спиртом, а затем 2% раствором йода. Материал следует брать из глубины, избегая контаминации поверхностной микро-флорой.

Материал из ушей

Отделяемое из среднего уха берут стерильным ватным тампоном. Наиболее достоверные результаты получают при пункции среднего уха через не прорвавшуюся барабанную перепонку. При наружном отите следует обрабатывать кожу прилегающих областей тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта, чтобы при взятии материала не было контаминации тампона сапрофитной микрофлорой. Тампоны помещают в стерильные пробирки. Допускается хранение тампонов с мате¬риалом в холодильнике не более 2-3 часов.

Материал из глаз

Стерильным ватным (тонким) тампоном, или бактериологической петлей, или стерильной глазной палочкой берут отделяемое с внутренней поверхности нижнего века по направлению к внутреннему углу глазной щели. Необходимо следить, чтобы ресницы при моргании не касались тампона. При отсутствии видимого гноя следует пользоваться тампонами, смоченными стерильным изотоническим раствором. Секрет из слезного мешка берут стерильным ватным тампоном после осторожного массажа. Материал с роговицы берут платиновой петлей после местного обезболивания.

При наличии корочек их предварительно удаляют пинцетом, и взятие материала проводят стерильным увлажненным (0,5 мл. физиологического раствора) ватным тампоном из образовавшихся язвочек.

Пунктаты из стерильных полостей

Взятие исследуемого материала производят стерильным шприцем. Кожу в области прокола дезинфицируют 75% спиртом. Перед проколом производят надрез кожи для предотвращения попадания частиц кожи в полость. Взятый материал помещают в стерильную пробирку. Можно доставлять материал прямо в шприце.

Суставную, плевральную и перитонеальную (асцитическую) жидкости исследуют, придерживаясь следующих правил:

1. Чрезкожную пункцию и аспирацию жидкости осуществляет ветеринарный врач с соблюдением правил асептики.
2. Обрабатывают кожу в области пункции 70% спиртом и затем дезинфицируют йодным раствором (1-2% йодной настойки).
3. Удаляют попавшие в шприц пузырьки воздуха и помещают жидкость в анаэробную транспортную систему или отправляет ее на исследование в шприце.
4. Взятие материала тампонами лучше не производить, поскольку это не предохраняет анаэробы от воздействия кислорода воздуха. Не следует также использовать антикоагулянты, так как цитрат и ЭДТА подавляют рост некоторых бактерий.
5. Необходимо отбирать оптимальное количество исследуемой жидкости: для вы¬деления анаэробов - 1-5 мл., для выделения микобактерий - 10 мл., для исследования на грибы - 10 мл.

Материал из носовой и ротовой полостей

Материал из зева отбирают, аккуратно прижимая язык шпателем и вводя стерильный ватный тампон. Движением тампона вперед и назад собирают материал с задней поверхности глотки, миндалин и участков воспаления или изъязвления.

Материал из носовой полости берут для выяснения носительства стафилококков или при хронических патологических процессах. Вводят стерильный ватный тампон (предварительно смоченный в физиологическом растворе) в носовой ход до упора на уровне носовой раковины и вращательными движениями тампона собирают материал со слизистой оболочки. Так¬же повторяют в другом носовом ходу.

Материал при инфекциях нижних дыхательных путей

Мокроту необходимо отбирать при свободном откашливании животного. Если мокроту получить не удается, необходимо животному накануне дать отхаркивающие средства. Исследуют утреннюю порцию мокроты. Перед сбором мокроты ротовую полость промывают теплым раствором антисептика. Мокроту собирают в стерильную посуду. Наиболее информативно исследование мокроты, полученной при бронхоскопии, так как она практически не загрязнена микрофлорой верхних дыхательных путей и ротовой полости.

Моча

Моча является продуктом обмена веществ, образующимся при фильтрации крови в почках. Состоит из воды (96%), конечных продуктов обмена (мочевина, мочевая кислота), минеральных солей в растворенном виде, различных ядовитых веществ. Анализ мочи дает представление не только о функциональном состоянии почек, но и о процессах обмена, протекающих в других тканях и органах и в организме в целом. Способствует выяснению патологических процессов и помогает судить об эффективности проводимого лечения. Для клинического анализа сдают порции утренней мочи, ее собирают в чистую стеклянную посуду и хорошо укупоривают. Перед этим необходимо совершить туалет наружных половых органов.

Мочу получают во время мочеиспускания, надавливанием на мочевой пузырь, путем катетеризации, а также с помощью пункции мочевого пузыря (уроцистоцентез).

При естественном мочеиспускании и надавливании на мочевой пузырь первую, наиболее загрязненную порцию мочи не исследуют. Для бактериологического исследования следует брать среднюю или последнюю порцию утренней мочи после тщательного туалета наружных половых органов (мытье кипяченой водой с хозяйственным мылом). Мочу собирают в стерильную пробирку (банку) в количестве не мене 3-5 мл. Катетеризация мочевого пузыря используется редко, так как она может привести к инфицированию мочеполовых путей. К катетеризации мочевого пузыря прибегают для уточнения локализации инфекционного процесса - в мочевом пузыре или почках. С этой целью мочевой пузырь опорожняют катетером и промывают раствором фурациллина (1:5000), после чего с интервалом в 10 минут берут пробы мочи. При поражении мочевого пузыря моча некоторое время остается стерильной, а при локализации инфекционного процесса в почках микроорганизмы будут содержаться во всех порциях мочи.

Техника катетеризации у кобелей. Используют человеческие уретральные катетеры диаметром от 1,5 до 3,5 мм. Катетеры стерилизуют, а перед введением смазывают стерильным глицерином, вазелиновым маслом, линиментом синтомицина. Самцов кладут на бок, выводят половой член из препуциального мешка, обрабатывают его раствором антисептика, легкими вращательными движениями вводят пластиковый катетер в уретру. Трудности могут воз¬никнуть при спазме уретры, в случае большого диаметра катетера, а также во время прохождения изгиба уретры. Присоединенным к катетеру шприцем отсасывают мочу. Желательно затем промыть мочевой пузырь раствором фурацилина.

Техника катетеризации у сук. Используют пластиковые или металлические катетеры, которые стерилизуют, а перед введением смазывают стерильным глицерином, вазелиновым маслом, линиментом синтомицина. Манипуляцию проводят на стоячем животном. У суки обмывают раствором антисептика наружные половые органы, раскрывают пальцами или носовым (ушным) расширителем половые губы, в отверстие уретры легкими вращательными движениями вводят катетер, продвигают на отмеренное расстояние, отсасывают мочу шприцем, промывают мочевой пузырь раствором фурацилина.

Техника уроцистоцинтеза. Животному вводят нейролептик, укладывают на спину, фиксируют голову и конечности, пальпируют мочевой пузырь, который должен содержать достаточное количество мочи, фиксируют с боков рукой, вводят иглу под углом 45° к коже, направляя ее сверху вниз и от головы к хвосту.

Конец иглы должен войти в мочевой пузырь поблизости от перехода в уретру. Мочу отсасывают шприцем, затем вводят небольшое количество раствора фурацилина.

Материал из половых органов самки (наружные половые органы, преддверие влагалища)

Отделяемое берут после тщательного туалета наружных половых органов стерильными ватными тампонами на деревянной или алюминиевой палочке. Взятый материал помещают стерильную пробирку - «влажную камеру».

• Материал из влагалища берут после введения влагалищного зеркала, из патологически измененных участков слизистой оболочки (язвы, раны, изъязвления). Для взятия пробы используют стерильный ватный тампон.
• Материал из шейки матки берут с помощью влагалищного зеркала. Тщательно обрабатывают влагалищную часть тампоном, смоченным физиологическим раствором, после чего ватный тампон осторожно вводят, не касаясь стенок влагалища.
• Материал из матки берут, используя специальные инструменты или при хирургических вмешательствах. Кроме этого можно про¬изводить катетеризацию матки. Однако у сук она затруднена вследствие анатомических особенностей половых органов.

Материал из половых органов самцов

• Выделения из препуция. Отделяемое берут после тщательного туалета наружных половых органов (обмывание теплой водой с мылом и обсушивание) стерильными ватными тампонами на деревянной или алюминиевой палочке. Аккуратно вводят стерильный ватный тампон в полость препуция и круговыми вращениями вокруг полового члена берут материал.
• Материал из уретры. Перед взятием материала необходимо уложить животное на бок, вывести поло¬вой член из препуциального мешка, затем обмыть головку полового члена теплой водой, с помощью ватного тампона удалить свободно стекающие выделения. Материал для исследования берут с помощью ватного тампона.
• Взятие секрета при простатитах

Необходимо произвести массаж пред¬стательной железы и собрать материал в стерильную пробирку или банку.

Проба крови

Взятие образцов крови

Условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов.

В организме различает артериальную, венозную и капиллярную кровь, которая имеет незначительные цитологические и биохимические отличия. Для морфологических исследований пользуются почти исключительно капиллярной кровью, а при биохимических – венозной.

Капиллярную кровь берут из внутренней поверхности ушной раковины. У птиц - из гребня, сережек, мякоти ступни.

Шерсть или перо на месте взятия крови выстригают, очищают место укола ватным тампоном, смоченным спиртом-эфиром. Укол делают на глубину до 2 мм. Первую каплю крови стирают, т.к. она содержит случайные примеси и лимфу, а последующие берут для исследования. Очень важно, чтобы кровь вытекала из ранки без надавливания на ткани, иначе она смешивается с лимфой и изменяет свой клеточный и биохимический состав. Истечение крови можно ускорить, если предварительно прогревать место укола в теплой воде или источником сухого тепла (фен, электролампа).

Когда для анализа необходимо большое количество цельной крови, сыворотки или плазмы, кровь у собак, кошек, пушных зверей кровь берут из латеральной подкожной вены предплечья или голени, лапки (пальца), кончика хвоста; у кур — из гребня или сережки, вен внутренней поверхности крыла; у уток и гусей — из ступни конечности или большой плюсневой вены, у крупного рогатого скота, лошадей, овец, коз, верблюдов берут из яремной вены, у свиней — из орбитального венозного синуса.

При венепункции прокол окружающих вену тканей и стенки вен делают в один прием. Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать противоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Место вкола обрабатывают аналогично получению капиллярной крови.

Кровь должна стекать по стенке пробирки во избежания разрушения эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с достаточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют настойкой йода.

У моногастричных животных кровь берут до кормления в утренние часы, у жвачных животных — утром через 4 ч после кормления. Время кормления существенно влияет на содержание в крови липидов, сахара, холестерина и некоторых других показателей. Чрезмерное возбуждение животного во время взятия крови (стресс) влияет на показатели кислотно-щелочного равновесия, сахара, многих гормонов, количество эозинофилов и лимфоцитов. Во многом биохимические показатели крови зависят от фармакологических препаратов, токсических веществ, испорченных кормов. Все эти факторы должны быть учтены при отборе проб крови.

В зависимости от задач исследования анализу подвергают цельную кровь, плазму или сыворотку.

Для получения пробы цельной крови или плазмы ее стабилизируют, т.е. в пробирку вносят противосвертывающее вещество - антикоагулянт. Антикоагулянты лучше применять в виде растворов.

Использование того или другого антикоагулянта определяется направлением исследования и сроками хранения. Так кровь, стабилизированная лимоннокислым или щавелевокислым натрием можно хранить не более суток. При изучении клеточного состава крови гепарин используют только для немедленных исследований, в противном случае он вызывает постепенное "старение" клеток и их распад. Повышенные дозы антикоагулянтов могут вызывать гемолиз эритроцитов или разведение пробы. Неверный выбор солей антикоагулянтов приводит к искажению результатов: ЭДТА-натрия и оксалат понижают содержание кальция; соли калия или натрия повышают содержание в пробе этих электролитов. Особенно чувствительны к введению посторонних веществ ферменты клеток и плазмы крови - при их определении используют цитраноглюкозную и другие специальные смеси.

Для получения сыворотки пробирки с кровью рекомендуется в процессе взятия крови помещать в термостат с температурой до 38°С. При массовых обследованиях животных таким импровизированным термостатом может быть достаточная емкость с водой указанной температуры. После завершения работ по взятию крови, свернувшиеся пробы обводят тонкой спицей из нержавеющей стали для лучшего отделения сыворотки и ставят в термостат при 37-38°С на 1-2 часа для окончательного отделения сыворотки. Сыворотку сливают и центрифугируют 20 минут при 2000-3000 об/мин.

Для получения плазмы кровь с антикоагулянтом центрифугируют 20-30 минут при 2000-3000 об/мин. Плазма крови отличается от сыворотки наличием фибриногена.

Цельную кровь, плазму и сыворотку для непродолжительного хранения помещают в холодильник (+2...+4°С), длительное хранение сыворотки требует температуры - 20°С.

Нарушение условий хранения проб может стать причиной погрешностей анализа. В результате длительного стояния сыворотки, над эритроцитами могут наступить сдвиги в концентрации ряда компонентов: повышается концентрация калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы, понижается содержание глюкозы вследствие гликолитических процессов. При температуре около 20°С в цельной крови возрастает содержание аммиака, многие ферменты даже при температуре холодильника быстро теряют свою активность (креатинкиназа, кислая фосфатаза), в лактатдегидрогеназа, напротив, быстрее теряет активность при низких температурах.

Возникший при взятии или хранении гемолиз эритроцитов приводит к повышению концентрации калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы. Неумелое встряхивание проб при перемешивании их содержимого или при транспортировке также может вызвать гемолиз эритроцитов.

Общий клинический анализ крови, определение в крови сахара проводят в день ее взятия, другие анализы обычно заканчивают в течение 1—3 дней. Для подсчета форменных элементов крови ее берут из капиллярных сосудов.

Кровь с антикоагулянтом хранят в закрытых пробирках в течение 24 ч при 2—8 °С, при комнатной температуре (15—20 °С) — 8 ч.

Приготовление мазков. На сухое подготовленное предметное стекло ближе к короткой стороне наносят стеклянной палочкой (или непосредственно из места укола пальца) небольшую каплю крови. Оставляют стекло в горизонтальном положении и размазывают кровь по стеклу с помощью сухого чистого шлифованного стекла, держа его под углом 45°. Коротким ребром, подождав, пока вся кровь не расплывется по нему, быстро проводят по предметному стеклу. Сильно нажимать на предметное стекло не следует, так как это может привести к повреждению форменных элементов крови. Мазки высушивают на воздухе и маркируют (лучше простым карандашом). Высохший мазок должен быть равномерно тонким, желтоватого цвета, достаточной величины, располагаться на расстоянии 1,0—1,5 см от краев стекла, занимать почти всю длину стекла и заканчиваться «метелочкой». Толстые (густо-розового цвета) мазки использовать не следует, так как в них морфология клеток трудноразличима.

Фиксация и окраска мазков крови. Перед окраской мазки крови обычно фиксируют 5–10 мин в метиловом спирте для предотвращения гемолиза, который может произойти при контакте с водой в процессе окрашивания водорастворимой краской или при последующем контакте с водой. Для окраски по Райту и Лейшману фиксация не требуется, так как эти краски содержат метиловый спирт.

Сухие мазки могут храниться в течение 2 дней в сухом теплом месте, в жаркой влажной атмосфере без фиксации они хранятся значительно меньше.

Для результативного лабораторного исследования необходимо брать у крупных животных (собак) - 10 мл., у мел¬ких животных - 5 мл. крови.

Испражнения (фекалии)

Кал — содержимое толстой кишки, выделяемое при дефекации. Представляет собой смесь, состоящую из непереваренных остатков пищи, пищеварительных соков, клеток эпителия и микробов, 95% которых мертвы.

Анализ его помогает в диагностике заболеваний органов пищеварения. Может производиться без специальной подготовки больного или, при изучении функциональной способности кишечника, после 3-4 дней специальной диеты. Кал для анализа собирают в сухую чистую посуду, при бактериологическом обследовании — в стерильную пробирку. Простейших паразитов выявляют немедленно после дефекации. За 2-3 дня следует воздержаться от приема некоторых лекарственных средств (препаратов железа, висмута, викалина), меняющих его характер и цвет, а при исследовании на содержание крови — от мясных и рыбных продуктов.

Осмотр кала предполагает определение его количества, консистенции, формы, цвета, запаха, остатков пищи, примесей крови, слизи, глистов.

Фекалии у животных берут либо из прямой кишки, либо с земли (или пола) в зависимости от вида гельминта в количестве 4-10 г. При взятии их из прямой кишки на руки надевают тонкие резиновые перчатки или напальчники. При исследовании на кишечные стронгилятозы и легочные гельминты (особенно при диктиокаулезе) фекалии нужно брать только из прямой кишки во избежание загрязнения исследуемого материала личинками свободно живущих гельминтов. Допустимо отбирать пробы с пола, когда исследования проводят на заболевания, при которых го яиц не выходят личинки (фасциолез, дикроцелиоз, мониезиозы, аскаридиозы и т.д.).

Доставляют пробы фекалии в стеклянной, пластмассовой таре, целлофановых мешочках или пергаментной бумаге.

Собирать кал для исследования следует утром. Если это затруднительно, можно подготовить пробу заранее, но не более чем за 8 часов перед сдачей кала в лабораторию. В этом случае хранить пробу следует в холодильнике (не замораживать).

Исследование кожных соскобов

Большинство болезней кожи имеют сходную клиническую картину, однако можно выделить девять основных групп характерных дерматологических нарушений:

• зуд;
• алопеция;
• образование чешуек/корок/себорея;
• макулы/папулы/вскрывающиеся пустулы;
• узлы/опухоли;
• свищи;
• язвы;
• изменения пигментации;
• отиты.

Как только врач - клиницист начнет относить каждого пациента к какой - либо из перечисленных выше категорий, ему станет намного проще формировать список дифференциальных диагнозов и разрабатывать диагностический план. Необходимо помнить, что у пациента могут быть сопутствующие болезни в настоящий момент времени, которые затрудняют постановку основного диагноза.

Наиболее простые и быстрые диагностические тесты, используемые на практике:

• соскобы кожи;
• трихоскопия;
• вычёсывание гребнем или щёткой;
• скотч - тест;
• исследование на дерматофиты;
• цитология кожи.

Кожные соскобы

Данное исследование должно проводиться во всех случаях! Для проведения кожных соскобов необходимо следующее оборудование и материалы: минеральное масло, предметные стёкла, лезвие скальпеля или шпатель (кюретка), микроскоп.

Предпочтительно сначала подстричь шерсть с выбранных участков кожи перед взятием соскоба. Для получения поверхностного соскоба достаточно поскоблить кожу лезвием скальпеля или шпателем, смоченным минеральным маслом. Для получения глубокого соскоба материал соскабливается до появления капель капиллярной крови. Материал наносится на предметное стекло с каплей минерального масла, накрывается покровным и исследуется под микроскопом (сначала под объективом 4х, затем 20х). Важно проводить соскоб с периферии максимально свежих очагов поражения. Необходимо тщательно исследовать все поля зрения препарата, причём успех обнаружения паразитов больше зависит от качества получения материала и выбора места для соскоба, чем от количества стёкол. Артефактами могут быть пузырьки воздуха в масле, чешуйки эпидермиса, их необходимо дифференцировать от клещей.

Вычёсывание гребнем /щёткой и осмотр материала

Позволяет обнаружить некоторых паразитов (блох, хейлетиелл) и возбудителей дерматофитоза. Для этого необходимы следующие материалы: частый гребень или щётка/зубная щётка, белая фильтровальная бумага, в некоторых случаях питательная среда для дерматофитов.

Техника проста: вычесанная шерсть помещается на влажную фильтровальную бумагу, при наличии экскрементов блох легко обнаруживаются красно-коричневые точки на белой бумаге. Хейлетиелл и других поверхностных паразитов можно увидеть при малом увеличении микроскопа (объектив 4х) или при помощи лупы. Метод Макензи (Mackenzie) предполагает вычёсывание шерсти при помощи зубной щётки для дальнейшего культивирования дерматофитов на селективных питательных средах.

Обследование на дерматофитозы

Исследование в лучах лампы Вуда – крайне неспецифично, однако при выявлении флюоресценции, пораженные волоски выщипываются и подвергаются дальнейшему исследованию (микроскопии после обработки препарата раствором щёлочи, посев для выявления культуры дерматофитов).

Скотч-тест

Данный тест позволяет обнаружить хейлетиелл и других паразитов, а в некоторых случаях может использоваться для проведения цитологического исследования. Для этого теста необходим обычный канцелярский скотч и «быстрые» краски (например, Дифф-Квик).

Для обнаружения паразитов необходимо предварительно взъерошить шерсть животного, затем быстро многократно прижать полоску скотча к шерсти животного, двигая её в направлении от хвоста к голове (против роста шерсти). Далее полоску скотча приклеивают к предметному стеклу и исследуют под малым увеличением микроскопа (объектив 4х). Таким образом, можно обнаружить возбудителей педикулёза (у собак – кусающая вошь Trichodectes canis, сосущая вощь – Linognatus setusus, у кошек Felicola subrostrata), хейлетиеллёза – Cheyletiella spp.и др.

Для получения материала для цитологии необходимо коротко подстричь шерсть с выбранного участка, плотно прижать полоску скотча, затем её поочерёдно опускают в растворы красителей, приклеивают на предметное стекло и проводят микроскопию. Этим методом легко выявляются дрожжевые грибы рода Malassezia в форме «матрёшки», бактерии рода Simonsiella (свидетельствует о попадании слюны при вылизывании) и др.

Трихоскопия

Трихоскопия – исследование волос. При помощи трихоскопии можно диагностировать ряд болезней фолликулов и волос, провести оценку содержимого воронки фолликула, идентифицировать паразитов, выяснить причины алопеции. Материал получают путём удаления хирургическим зажимом 50-100 шерстинок. При одномоментном удалении не более 30 волос эта процедура вполне безболезненно переносится собакой. Выщипанные волосы размещают на предметном стекле, предварительно добавив минеральное масло. Препарат накрывают покровным стеклом.

Трихоскопия может оказаться полезной при диагностике некоторых паразитарных болезней, например, позволяет дифференцировать педикулёз и хейлетиеллёз (гниды вшей плотно прикреплены к волосу, а яйца хейлетиелл лежат свободно). Трихоскопия материала, полученного из межпальцевых зон, может помочь при диагностике пододемодекоза.

Цитология кожи

Цитология кожи – быстрый, неинвазивный метод, имеющий большую диагностическую ценность. Данный вид исследования особенно ценен для диагностики нодулярных, экссудативных, гнойничковых поражений, при образовании корок и себорее, а также при отитах. При нодулярных поражениях предпочтительнее получение материала путём тонкоигольной аспирации при помощи шприца объёмом 10 мл с иглами 21G, 24G. При мокнущих поражениях можно проводить исследование мазков-отпечатков. Также цитологическому исследованию подвергают скотч-препараты, и, конечно, глубокие соскобы. Препараты высушивают на воздухе, можно использовать фиксацию метанолом. Просмотр препаратов проводят последовательно с использованием объективов 4х, 10х, 40х, 100х (с иммерсионным маслом).